1 前言

蛋白質是人體必需的營養成分，大豆作為重要的植物蛋白來源，其蛋白質含量是衡量大豆品質的核心指標之一。我國相關標準對不同用途的大豆（如食品加工、飼料用）均有明確的蛋白質含量要求，準確測定大豆中的蛋白質含量對育種、收購、加工及質量控制具有重要意義。

本方案依據《GB 5009.5-2025 食品安全國家標準 食品中蛋白質的測定》中第一法凱氏定氮法的全自動凱氏定氮儀法（5.2節），采用優云譜全自動凱氏定氮儀配合消化爐進行測定。該方法將消解與檢測流程無縫銜接：樣品在消化爐中消化完全后，消化管直接轉移至凱氏定氮儀，由儀器自動完成蒸餾、滴定及結果計算，具有自動化程度高、結果準確、重復性好的特點，適用于大豆及其他高蛋白食品中蛋白質的批量檢測。

圖 1全自動凱氏定氮儀

2 儀器與試劑

2.1 儀器

優云譜全自動凱氏定氮儀（配有滴定系統、蒸餾系統）

消化爐（控溫精度±1℃，最高溫度≥420℃）

分析天平（感量0.001g）

配套消化管、移液管、量筒等玻璃器皿

粉碎機

圖 2 全自動凱氏定氮儀及消化爐外觀圖

2.2 試劑

硫酸銅（CuSO?·5H?O）、硫酸鉀（K?SO?）、硫酸（H?SO?，98%）

氫氧化鈉（NaOH）、硼酸（H?BO?）

硫酸標準滴定溶液[c(1/2H?SO?) = 0.1 mol/L]

甲基紅指示劑（1 g/L）、溴甲酚綠指示劑（1 g/L）

混合指示劑B：1份甲基紅乙醇溶液與5份溴甲酚綠乙醇溶液混勻

水：符合GB/T 6682規定的三級水

3 實驗方法

3.1 試樣制備

取代表性大豆樣品，粉碎后過0.9 mm（20目）篩，混勻后密閉保存。

3.2 試樣稱量與消解

稱取約0.2 g試樣（精確至0.001 g），置于消化管中，依次加入硫酸銅0.4 g、硫酸鉀6 g、硫酸15 mL。輕輕搖勻后置于消化爐中，于420℃恒溫消解至少1小時，至消解液呈藍綠色透明狀。冷卻后直接用于蒸餾滴定。同時進行空白試驗。

圖 3 消化爐消解過程圖

3.3 蒸餾與滴定

啟動全自動凱氏定氮儀并預熱，檢查堿液（氫氧化鈉溶液）、吸收液（硼酸溶液與混合指示劑B的混合液）及滴定液（硫酸標準滴定溶液）是否已準備充足。

將裝有消解液的消化管（包括試樣和空白管）依次置于定氮儀樣品盤上。根據儀器操作說明，設定蒸餾滴定參數，如加堿量、蒸餾時間、接收液體積等。

儀器將自動執行加堿蒸餾：按消解用酸量的4倍加入氫氧化鈉溶液進行堿化蒸餾，釋放的氨被硼酸吸收后，以硫酸標準滴定溶液自動滴定至終點（混合指示劑B由藍綠色變為淺灰紅色）。

滴定完成后，儀器自動記錄滴定體積并計算蛋白質含量，分別輸出試樣消耗體積V?和空白消耗體積V?。

圖 4 滴定參數設置界面及全自動凱氏定氮儀工作圖片

4 結果與討論

4.1 計算公式

式中：

X：蛋白質含量（g/100g）

V?：試樣滴定體積（mL）

V?：空白滴定體積（mL）

c：硫酸標準滴定溶液濃度（mol/L）

m：試樣質量（g）

F：蛋白質折算系數（大豆取6.25）

4.2 測試結果

注：c = 0.1059 mol/L，V? = 0.166 mL，F = 6.25，結果保留三位有效數字。

圖 5 檢測結果截圖

4.3 精密度

兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的5%，符合GB 5009.5-2025標準要求。

5 方案特點與優勢

5.1 針對大豆樣品的方法優勢

樣品粉碎過篩，確保消化均勻

高溫消解徹底，氮釋放完全

消解后直接上機，減少操作誤差

5.2 儀器設備優勢

消化爐加熱均勻、耐腐蝕，可批量處理

全自動凱氏定氮儀實現自動化蒸餾、滴定、計算，數據可存儲導出，支持智能化管理

5.3 關鍵操作要點

樣品必須完全過20目篩

消解液呈藍綠色透明狀為終點

堿液添加量應為硫酸體積的4倍，確保強堿性

空白值應穩定且低于0.2 mL

滴定液需定期標定，確保濃度準確

折算系數F=6.25，適用于大豆及其制品

6 結論

本方案采用全自動凱氏定氮儀配合消化爐，建立了大豆中蛋白質含量的測定方法。方法嚴格遵循GB 5009.5-2025國家標準，操作簡便、結果準確可靠，適用于大豆原料、豆制品及飼料等樣品的批量檢測，為育種、收購、加工及質量控制提供有力支持。

7 參考文獻

[1] GB 5009.5-2025 食品安全國家標準 食品中蛋白質的測定[S].

[2] GB/T 601 化學試劑 標準滴定溶液的制備[S].